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人胃癌細(xì)胞SNU-5細(xì)胞 抗體庫技術(shù)

2013年08月09日 10:02通派（上海）生物科技有限公司點(diǎn)擊量：1856

人胃癌細(xì)胞SNU-5細(xì)胞   抗體庫技術(shù)

 
 90年代初提出了抗體庫技術(shù)?？贵w庫技術(shù)簡單地說就是用細(xì)菌克隆取代B細(xì)胞克隆來表達(dá)抗體庫（repertoire）。由于RT-PCR技術(shù)的發(fā)展，大腸桿菌直接表達(dá)有功能性抗體分子片斷的成功以及噬菌體顯示技術(shù)（phage display）的問世，在90年代初出現(xiàn)噬菌體抗體庫（phage antibody library）技術(shù)，該技術(shù)使得人們從應(yīng)用DNA重組技術(shù)改造現(xiàn)有的單抗發(fā)展到用基因工程技術(shù)克隆新的單抗，從而使抗體工程進(jìn)入一個全新的時期。
　　人胃癌細(xì)胞SNU-5細(xì)胞   抗體庫技術(shù)噬菌體抗體庫 繼雜交瘤技術(shù)之后又一突破性進(jìn)展的用于制備新型抗體的是噬菌體抗體庫技術(shù)。Winter等人在1994年創(chuàng)建了噬菌體抗體庫技術(shù)，克服了人體不能隨意免疫的缺點(diǎn)，用人的外周血制備抗體文庫，從而獲得人源性基因工程抗體。而且將抗體基因的克隆和表達(dá)融為一體，同在一種載體上進(jìn)行，將抗體基因表達(dá)在載體的表面，用固相化抗原對表達(dá)產(chǎn)物的載體進(jìn)行淘篩（panning），在數(shù)日內(nèi)就可篩選出陽性克隆，從而能構(gòu)建出大庫容文庫囊括天然全套抗體基因，人們*可以用基因工程方法研制任何一種具有高度特異性的抗體，使抗體工程的設(shè)想成為現(xiàn)實。采用噬菌體抗體庫技術(shù)篩選抗體不必進(jìn)行動物免疫，易于制備稀有抗原的抗體及篩選全人源性抗體、高親和力抗體。同時也將抗體工程的研究推向了新高潮。
1.方法簡單易行，節(jié)省時間?？赏ㄟ^發(fā)酵生產(chǎn)、大量制備。
　　2.篩選容量增大，可在數(shù)周內(nèi)篩選100萬-1億個克隆，可獲得高親和力的人源化抗體。
　　3.可直接從未經(jīng)免疫的人或小鼠的淋巴細(xì)胞中得到抗體基因或IgV區(qū)基因，因此可以獲得*人源化的抗體，克服了人雜交瘤細(xì)胞不穩(wěn)定的缺點(diǎn)，避開了人工免疫和雜交瘤技術(shù)。
　人胃癌細(xì)胞SNU-5細(xì)胞   抗體庫技術(shù)　4.可模仿體內(nèi)免疫過程，模擬天然全套抗體庫，方便的“制造”和克隆針對任何抗原的抗體。
　　隨著基因工程抗體技術(shù)的發(fā)展，在我國有些實驗室開始了噬菌體抗體庫的構(gòu)建。用抗體庫技術(shù)可直接制備人源抗體，例如利用被病原微生物感染的病人外周血細(xì)胞制備噬菌體抗體庫，用特定抗原進(jìn)行篩選，獲得抗乙肝表面抗原、甲肝病毒的人源抗體?？贵w庫技術(shù)也被用于抗體性能改良，例如用鏈替換方法，以親本抗體的一條鏈（輕鏈）與另一條鏈 （ 重鏈）的文庫組合，構(gòu)建抗體庫，篩選高親和力的克隆，再固定重鏈，用同樣方法選擇具有更高親和力的輕鏈。一些特異性好、有應(yīng)用前景的鼠抗體，利用抗原表位定向選擇（EGS）方法，以鼠單抗可變區(qū)為模板，經(jīng)噬菌體展示技術(shù)，通過抗原導(dǎo)向，篩選能夠模擬鼠單抗可變區(qū)、結(jié)合相同抗原決定簇的人抗體，經(jīng)這一方法獲得人源抗體。國內(nèi)也有實驗室在計算機(jī)輔助設(shè)計下，將鼠抗體表面氨基酸殘基“人源化”，主要將鼠 Fv段表面暴露的骨架區(qū)殘基中與人Fv不同者改為人源性，使Fv的表面人源化，但仍保留其與抗原結(jié)合的特性。目前的問題是，有很多試劑型抗體或診斷用抗體進(jìn)入市場，而治療用抗體只有少數(shù)進(jìn)入臨床試驗。分析主要原因，一是工程抗體表達(dá)量低。國內(nèi)很多實驗室，真核細(xì)胞中抗體表達(dá)量在1 毫克／升以下，很難用于生產(chǎn)。僅個別實驗室在對載體進(jìn)行改造后，抗體表達(dá)量達(dá)到40毫克／升。二是動物細(xì)胞規(guī)模化培養(yǎng)技術(shù)還不成熟，與國外相比存在很大差距。由于技術(shù)和經(jīng)費(fèi)等原因，我們動物細(xì)胞培養(yǎng)的規(guī)模zui大為50升，培養(yǎng)方式大多是采用微載體，懸浮批次和懸浮灌流尚屬空白。在噬菌體抗體庫的基礎(chǔ)上，在近幾年又發(fā)展了核糖體展示抗體庫技術(shù)。核糖體展示抗體庫技術(shù)代表了抗體工程的將來發(fā)展趨勢。
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